里，跟第三代火影挑战。
战斗中，大蛇丸还以秽土转生的形式，将初代目火影与二代目火影复活，并将他们的意志完全抹杀，二人无法发挥原本的实力。
在战斗过程中，使用水遁忍术与木遁秘术与猿飞日斩展开激烈的战斗，他在往日的师父面前露出自己的真面目。
第三代火影猿飞日斩，见往日弟子已经走火入魔，决定清理门户。
二人交战时最初打得不相上下，第三代火影虽被称为“最强火影”，但由于年迈体衰，实力不如年轻时期，无法招架。
最后，猿飞日斩只好使用当年四代目火影封印九尾的忍术——尸鬼封尽。
但由于在封印过程中，大蛇丸操纵草雍剑将第三代火影重创，最终未能完全封印大蛇丸，只废了他的双手，使其无法使用忍术。
他的双手被废掉后，失去了使用忍术的能力（因为绝大部分忍术皆要以手结印和提炼查克拉才能使出），只好带领音忍撤退。
……
当投影画面消失后，猿飞日斩依旧呆愣在原地。
他对天道楼先生的推演，没有怀疑。
猿飞日斩知晓，这一切都是真实的。
他没有想到，大蛇丸竟然会这般疯狂。